|
بیوتکنولوژی انتقال ژن در ماهی زبرا به عنوان مدل تحقیقاتی انتقال ژن در آبزیان پرورشی
|
شیرین جمشیدی*   ، اشکان بنان |
| انستیتو تحقیقات بین الملی ماهیان خاویاری |
|
|
چکیده: (1604 مشاهده) |
| جهت ایجاد ماهی رنگی زینتی زبرا، واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR) با استفاده از آغازگرهای طراحی شده برای پیشبر دو ژن انتخاب شده در سلولهای عضلاتی و همسانهسازی این قطعات ژنی در وکتور Tol2 که خود حاوی ژن پروتئین فلوئورسنت سبز (GFP) بود در ناحیه خوانش باز (ORF) صورت گرفت. به ترتیب قطعات 2000 و 2300 جفت بازیِ ناحیه پیشبر ژنهای MYLZ2 و CKMB بوسیله واکنش زنجیرهای پلیمراز تکثیر شده، در وکتور بیانی Tol2 دارای جایگاه برشی آنزیم SalI همسانهسازی شد و به باکتری اشریشیاکلی (E. coli) سویه Dh5α انتقال یافت. همسانههای مثبت توسط colony PCR با استفاده از آغازگرها مورد بررسی قرار گرفت و برای استخراج پلاسمید نوترکیب کشت شد. پلاسمید نوترکیب استخراج شده توسط هضم آنزیمی SalI بررسی شد و به کمک آغازگرهای عمومی تعیین توالی گردیدند. در این مطالعه، به ترتیب قطعات 2000 و 2300 جفت بازیِ راه انداز ژنهای MYLZ2 و CKMB در وکتور بیانی Tol2 همسانهسازی شدند که تایید آن با استفاده از واکنش زنجیرهای پلیمراز، توالییابی و هضم آنزیمی صورت گرفت. همچنین، پلاسمید نوترکیب کشت داده شد و برای تزریق به همراه یک رونوشت سنتتیک خالصسازی گردید. جنینهای تک سلولی تزریق شده (توسط پلاسمید نوترکیب و رونوشت) به وسیله میکروسکوپ فلوئورسنس برای بررسی بیان GFP آزمایش شدند و مشخص شد که بیان GFP در سلولهای عضلانی برخی از نتاج نسل F0 روی داده است. پلاسمیدهای نوترکیب شده با استفاده از پیشبرهای مختص سلولهای عضلانی (MYLZ2 و CKMB) قادر به القاء بیان GFP در برخی از جنینهای نسل F0 به صورت موقت بودند و از این رو می توانند جهت تثبیت بیان در نسلهای بعدی ماهی استفاده شوند. |
|
| واژه‌های کلیدی: همسانهسازی، ماهی زبرا تراریخت رنگی، وکتور Tol2 نوترکیب، رونوشت |
|
|
متن کامل [PDF 837 kb]
(378 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
تخصصي
دریافت: 1398/9/23 | پذیرش: 1398/11/4 | انتشار: 1400/10/10
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
