TY - JOUR JF - aqudev JO - JAD VL - 15 IS - 4 PY - 2022 Y1 - 2022/1/01 TI - Gene transfer biotechnology in zebrafish as a gene transfer research model in farmed aquatic animals TT - بیوتکنولوژی انتقال ژن در ماهی زبرا به عنوان مدل تحقیقاتی انتقال ژن در آبزیان پرورشی N2 - جهت ایجاد ماهی رنگی زینتی زبرا، واکنش زنجیره­ای پلیمراز (PCR) با استفاده از آغازگرهای طراحی شده برای پیشبر دو ژن انتخاب شده در سلول­های عضلاتی و همسانه­سازی این قطعات ژنی در وکتور Tol2 که خود حاوی ژن پروتئین فلوئورسنت سبز (GFP) بود در ناحیه خوانش باز (ORF) صورت گرفت. به ترتیب قطعات 2000 و 2300 جفت بازیِ ناحیه پیشبر ژن­های MYLZ2 و CKMB بوسیله واکنش زنجیره­ای پلیمراز تکثیر شده، در وکتور بیانی Tol2 دارای جایگاه برشی آنزیم SalI همسانه­سازی شد و به باکتری اشریشیاکلی (E. coli) سویه Dh5α انتقال یافت. همسانه­های مثبت توسط colony PCR با استفاده از آغازگرها مورد بررسی قرار گرفت و برای استخراج پلاسمید نوترکیب کشت شد. پلاسمید نوترکیب استخراج شده توسط هضم آنزیمی SalI بررسی شد و به کمک آغازگرهای عمومی تعیین توالی گردیدند. در این مطالعه، به ترتیب قطعات 2000 و 2300 جفت بازیِ راه انداز ژن­های MYLZ2 و CKMB در وکتور بیانی Tol2 همسانه­سازی شدند که تایید آن با استفاده از واکنش زنجیره­ای پلیمراز، توالی­یابی و هضم آنزیمی صورت گرفت. همچنین، پلاسمید نوترکیب کشت داده شد و برای تزریق به همراه یک رونوشت سنتتیک خالص­سازی گردید. جنین­های تک سلولی تزریق شده (توسط پلاسمید نوترکیب و رونوشت) به وسیله میکروسکوپ فلوئورسنس برای بررسی بیان GFP آزمایش شدند و مشخص شد که بیان GFP در سلول­های عضلانی برخی از نتاج نسل F0 روی داده است. پلاسمیدهای نوترکیب شده با استفاده از پیشبرهای مختص سلول­های عضلانی (MYLZ2 و CKMB) قادر به القاء بیان GFP در برخی از جنین­های نسل F0 به صورت موقت بودند و از این رو می توانند جهت تثبیت بیان در نسل­های بعدی ماهی استفاده شوند. SP - 47 EP - 55 AU - Jamshidi, ُShirin AU - Banan, Ashkan AD - International Sturgeon Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Rasht, Iran KW - cloning KW - transgenic colorful zebra fish KW - recombinant Tol2 vector KW - transcript UR - http://aqudev.liau.ac.ir/article-1-677-fa.html DO - 10.52547/aqudev.15.4.47 ER -